Échantillonnage d'E.coli avec R-Cards™

Conseils sur l'utilisation des R-Cards™ pour l'échantillonnage d'E.coli

Water Rangers a développé un kit d'échantillonnage complet et un protocole pour guider les testeurs bénévoles dans l'obtention de résultats toujours fiables.

En guise d'alternative, nous avons adopté la méthode de test rapide ROTH R-Card™. Cette approche permet aux volontaires de traiter des échantillons à domicile à l'aide d'un petit incubateur économique et de communiquer leurs résultats. Les cartes R fournissent une indication fiable des niveaux d'E. coli dans les échantillons. Leur faible coût permet de réaliser plusieurs tests, ce qui contribue à identifier les points d'intérêt potentiels avant d'utiliser des méthodes de test plus précises.

Se préparer à tester

Avant de commencer les tests, assurez-vous d’avoir préparé votre kit, identifié votre lieu de test et établi le calendrier des tests et de l’incubation.

Le kit

Water Rangers a mis au point un kit d'échantillonnage et un protocole pour aider les testeurs bénévoles à obtenir des résultats toujours fiables.

Le Kit se compose de :

  • Un porte-échantillons pour permettre de disposer les cartes et de les maintenir à niveau – important pendant l'application de l'échantillon sur les cartes R.
  • Un cahier pour enregistrer les observations qualitatives dans le cadre de l'activité d'échantillonnage.
  • Un appareil de mesure combiné de conductivité et de température de l'eau.
  • Une tasse d'échantillonnage.
  • Un bâton de « reach » pour aider à collecter l'échantillon.
  • Gants de protection.
  • Sacs d’échantillonnage contenant trois cartes R et une seringue de 1 mL (ou 3 mL) – un sac par lieu et par événement de test.
  • Une petite serviette.
  • Un incubateur « personnel » à utiliser à la maison.
  • Un conductimètre

Les sacs d'échantillonnage seront fournis pour un test d'un mois - normalement 5 sacs par mois.

Choisissez les cartes R de 1 mL pour les concentrations élevées d'E. coli, par exemple supérieures à 500 UFC/100 mL. Ces cartes permettent d'obtenir des résultats à partir de 100 UFC/100 mL et sont destinées aux sites présentant des concentrations élevées d'E. coli.

Choisissez les cartes R.Cards de 3 mL pour les faibles concentrations d'E. coli. Plus sensibles, elles affichent des résultats à partir de 33 UFC/100 mL. Ces cartes sont destinées aux sites présentant de faibles niveaux d'E. coli.

À propos de R-Cards™

La R-CARD™ se compose d'une partie inférieure (3 cm x 4 cm) imprimée et de carrés de XNUMX cm (½ po), d'une partie supérieure en film transparent contenant une formule en poudre sur sa face inférieure et d'une impression textuelle indiquant le type de formule (par exemple, E. coli). La partie supérieure est pré-fixée à la partie inférieure.
Basé sur une technologie impliquant des composants secs attachés à une carte, il y a quelques éléments généraux à garder à l'esprit, qui sont communs à la plupart des produits de cette nature.

  • Ils doivent être conservés au sec et à l'abri de l'humidité. S'ils sont mouillés, ils
    devenir inutilisable.
  • Il est préférable que les cartes ne soient pas soumises à une lumière ou à une chaleur de forte intensité.
    En gardant ces éléments à l'esprit, il est préférable de conserver les R-CARDS dans les sacs scellés dans lesquels elles ont été livrées. Cela ne signifie pas qu'elles ne peuvent pas être exposées à des conditions normales pendant des jours ou des semaines où les températures ne dépassent pas 40 degrés Celsius ou où l'humidité est normalement inférieure à 100 %.

Pour de meilleures performances, les cartes doivent être conservées congelées jusqu'à ce qu'elles soient nécessaires à l'échantillonnage.

Échantillonnage d'E. coli avec R-Cards™

Préparez votre trousse

  • Mettez des gants
  • Étiquetez chaque carte avec la date, le lieu et le numéro de chaque carte (1 à 3).
  • Remplissez votre enquête sur les paramètres environnementaux et autres
  • Disposez les cartes R dans le plateau : assurez-vous qu'elles sont de niveau

Échantillonnage de produits

  • Rincer le récipient à échantillon 3 fois
  • Prélevez l’échantillon à 15 cm sous la surface, ou aussi profondément que possible sans inclure de sédiments.
  • Remplissez la seringue jusqu'au repère 1 mL (tapotez pour éliminer les bulles d'air !). Pour les cartes de 3 mL, remplissez jusqu'au repère 3 mL.
  • Soulevez doucement le film et vaporisez de l’eau sur la carte.
  • Déroulez le film sur l'échantillon, en laissant l'eau se répandre en un motif circulaire entre le film et la carte. L'eau doit se trouver dans la zone du film supérieur, mais n'a pas besoin de couvrir toute la zone. N'APPUYEZ PAS sur le film... laissez-le s'étaler.
  • Répétez l’opération pour chacune des trois cartes d’un emplacement en utilisant le même échantillon.
  • Laissez les cartes R se sceller (1 à 2 minutes), puis placez-les dans le sac et scellez-les.
  • Veuillez noter que les cartes de 3 mL sont moins absorbantes et qu'il faut donc faire attention lors de la distribution des 3 mL d'eau afin d'éviter tout débordement.

En cours

  • Conservez les cartes à l'abri de la lumière directe du soleil et au frais. Utilisez une compresse froide par temps chaud, mais NE placez PAS les cartes sur de la glace.
  • Allumez l'incubateur et laissez-le chauffer pendant 20 minutes jusqu'à atteindre 35 °C.
  • Les cartes doivent être placées dans l'incubateur dans les 3 heures suivant la collecte.
  • Incuber les cartes pendant 24 heures avant de compter les colonies.
  • Pour les cartes R de 1 mL, faites la moyenne des résultats des trois cartes, puis multipliez par 100 pour indiquer les unités formant colonies (UFC) par 100 mL.
  • Pour les cartes R de 3 mL, faites la moyenne des résultats des trois cartes, puis multipliez par 33 pour indiquer les unités formant colonies (UFC) par 100 mL.

Incubez vos R-Cards

Dans le cadre du kit de test R-Card, nous proposons un « incubateur domestique », un petit appareil alimenté par USB-C conçu à l'origine pour l'incubation à domicile de petits œufs. Il permet de maintenir une température d'incubation contrôlée et constante.

Réglez la température de l'incubateur à 35 °C (la valeur par défaut est de 37.8 °C) et laissez-le se réchauffer à cette température avant d'insérer les cartes R.

Résultats du comptage 24 heures après avoir placé les cartes dans l'incubateur. 

Ne comptez pas les colonies qui pourraient se développer après 48 heures, car les E. coli et les coliformes que vous surveillez se développent très rapidement et seront certainement visibles pendant cette période. 

Les cartes doivent être placées face imprimée vers le haut et peuvent être empilées les unes sur les autres.

Prendre soin de votre incubateur

L'incubateur est livré avec quelques éléments supplémentaires tels que des rouleaux et des bouteilles d'eau pour hydrater les œufs - ceux-ci ne sont pas nécessaires pour l'incubation des R-Cards et peuvent être conservés de côté.

L'incubateur est recouvert de polystyrène qui aide à retenir la chaleur et à minimiser les coûts énergétiques, alors gardez-le en place.

L'incubateur doit être nettoyé avant chaque utilisation avec une solution d'eau de Javel douce ou antibactérienne.

Interprétation de vos résultats : Comment pouvons-nous mesurer les risques sanitaires à la plage en utilisant E.coli ?

La concentration d'E.coli dans un échantillon d'eau est généralement mesurée pour 100 ml. Les méthodes pour mesurer E.coli comprennent la filtration sur membrane (CFU), la fermentation multitubes (MPN) et des méthodes de traitement plus rapides telles que les méthodes qPCR. 

Au Canada, les lignes directrices du gouvernement fédéral, les Lignes directrices pour la qualité des eaux récréatives au Canada , concernant E. coli sont les suivantes :

Directives E.coli pour les loisirs avec contact primaire∗ 

  • Concentration moyenne géométrique (minimum 5 échantillons) ≤ 200 E. coli /100 mL 
  • Concentration maximale d'un seul échantillon ≤ 400 E. coli /100 mL

Les pays, les États et les provinces ont leurs propres normes et protocoles, mais la plupart sont très similaires lorsqu'il s'agit de quantifier E. coli à la plage.

Les seuils pour E. coli dans les eaux de baignade anglaises :

  • Excellent:Le seuil d'E. coli est ≤ 500 unités formant des colonies pour 100 ml (UFC/100 ml)
  • Bon:Le seuil d'E. coli est ≤1000 UFC/100 mL
  • Suffisant:Le seuil d'E. coli est ≤900 UFC/100 mL
  • Médiocre:Les valeurs d'E. coli sont pires que le seuil suffisant 

En Écosse, les valeurs sont :

  • Excellent:Le seuil d'E. coli est ≤250 UFC/100 mL
  • Bon:Le seuil d'E. coli est ≤500 UFC/100 mL

Enregistrement des résultats

Les résultats moyens peuvent être enregistrés à l'aide de l'application ou du site web Water Rangers. Indiquez sur le compte rendu d'observation l'utilisation d'une fiche R. Ces résultats sont disponibles sur waterrangers.com/community-lab-results.

Pour les groupes de test de la rivière Wey, vous pouvez saisir vos résultats à l' adresse https://forms.gle/H8u1WaEMM5i6v1qz8 et ces résultats sont affichés sur riverweytrust.org.uk/waterquality.

Vidéo explicative de Kentucky Watershed Watch

Des commentaires ? Nous sommes à votre écoute.

Nous aimerions connaître votre expérience et vos commentaires sur le kit de test E. coli. Vos réponses nous aideront à améliorer le kit et notre processus de formation. Toutes les réponses sont confidentielles et seront utilisées uniquement pour améliorer le programme.

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